BioThema*專注于螢火蟲熒光素酶反應的分析應用，無論是檢測細胞，測量酶活性還是其他東西。在該反應中，用ATP（三磷酸腺苷）活化熒光素，然后氧化成氧化熒光素和CO 2。氧化熒光素以激發(fā)態(tài)形成，并在進入其基態(tài)時發(fā)光。通常在所謂的發(fā)光計中測量光。
ATP + 熒光素+ O 2 -熒光素酶 - > AMP +焦磷酸+氧化熒光素+ CO 2 +光
在ATP的測定中，光發(fā)射可以基本上恒定或快速衰減。因此，基于螢火蟲熒光素酶反應，存在穩(wěn)定的光和閃光型ATP試劑。在熒光素酶水平低的情況下，每分鐘消耗的ATP比例可以忽略不計，然后光可以幾乎恒定但也很低。在高水平的熒光素酶下，ATP被消耗是不可避免的，導致光迅速減少，但初峰值光很高。實際上，峰高和衰減率都與熒光素酶活性成比例。BioThema開發(fā)了三種ATP試劑
BioThema 266-111說明書
SKU：266-111
該試劑盒的靈敏度允許在各種情況下測定低ATP水平，條件是降解體細胞中的ATP并不重要：
1。液體的細菌控制（例如飲用水，工藝用水，飲料和啤酒）
2。藥品和化妝品
3.細胞與表面的粘合
4.洗衣的質量保證
5.細菌生長。
6.對細菌的抗生素作用
該試劑盒用于測定活細胞中的細胞內ATP（三磷酸腺苷）。樣品中的細胞外ATP被酶促降解。如果樣品還含有體細胞并且目的是確定微生物ATP，我們建議使用266-112微生物ATP試劑盒，包括用于大多數動物細胞的細胞裂解試劑。如果樣品中只有一種類型的細胞且沒有細胞外ATP，則可以使用266-311 ATP生物質試劑盒。所有活細胞都含有ATP，它在不同細胞過程之間起著能量貨幣的作用。當細胞死于自然原因時，ATP通常會降解。在所有類型的細胞中，小心地將ATP的細胞內濃度調節(jié)至相似水平。因此，ATP是細胞內總體積的良好估計。大多數細菌細胞含有大約。2×10-18 mol ATP /細胞，而大多數真核細胞由于其較大的尺寸，含有10-15 mol或更多的ATP。ATP生物質試劑盒HS，細胞內ATP試劑盒HS和微生物ATP試劑盒HS含有具有高熒光素酶活性的ATP試劑HS（高靈敏度）。ATP試劑HS中的熒光素酶活性實際上非常高，如果在重構過程中受到污染，它將每38分鐘將ATP背景降低一個數量級。混合樣品和ATP試劑HS后，光強度衰減約。每分鐘6％。這足夠慢以允許手動混合，并且可以使用沒有試劑分配器的管發(fā)光計。試劑的檢出限為10×10 -18使用靈敏的光度計測量ATP。這相當于5個細菌細胞。我們必須在這里區(qū)分細菌細胞和CFU，因為一個CFU可能由幾個細胞組成。如果檢測限不足，則可以通過微濾濃縮樣品，該過程也將除去大部分細胞外ATP。
可以使用任何管或微孔板發(fā)光計。應該注意的是，管發(fā)光計比微孔板發(fā)光計靈敏度大約一個數量級。如果使用微孔板發(fā)光計，它應該至少有兩個分配器，并且應該能夠混合微孔板。
詳細描述的程序可在“使用說明”中找到，該說明書隨每個套件一起提供。
該試劑盒包含用于150-375測定的試劑（每個小瓶ATP試劑HS足以在管發(fā)光計中進行25次測定，在微孔板發(fā)光計中進行62.5次測定）。
檢測限：
使用靈敏的發(fā)光計1，試劑的檢出限為10×10-18 mol ATP 。
1 Lundin，A。（2000）在生物量，酶和代謝物的ATP相關測定中使用螢火蟲熒光素酶。方法Enzymol。305,346-370。
2 Lundin，A。（1999）ATP檢測生物污染。在“30th R3-Nordic Contamination Control Symposium”（Eds.G.Wirtanen，S.Salo and A. Mikkola），VTT，Espoo，Finland，pp.337-352。
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