NFK GreenScreen™ Assays

NFK GreenScreen™檢測

色氨酸代謝在免疫調(diào)節(jié)和神經(jīng)退行性疾病中起重要作用。色氨酸代謝酶是癌癥免疫療法和神經(jīng)退行性疾病的重要藥物靶標(biāo)。為了高通量篩選色氨酸代謝酶，我們開發(fā)了NFK GreenScreen™檢測方法來篩選吲哚胺2,3-二加氧酶（IDO1）和色氨酸雙加氧酶（TDO）。

NFK Green™測定法可在溫和條件下工作，適用于高通量篩選。NFK GreenScreen™試劑盒包含所有進(jìn)行測定的成分，包括參考抑制劑。下面顯示了用NFK GreenScreen™測量的IDO1和TDO參考抑制劑的劑量反應(yīng)曲線。

該套件有五種格式：
1. hIDO GreenScreen™；包括純化的人吲哚胺2，3-二加氧酶（IDO1）
2。包括純化的人色氨酸雙加氧酶（TDO）
3。
mTDO GreenScreen™; 包括純化的小鼠吲哚胺2,3-二加氧酶（IDO1）4。包括純化的小鼠色氨酸雙加氧酶（TDO）
5。NFKGreen™用于基于細(xì)胞的篩選；用于基于細(xì)胞的測定 不含酶

與當(dāng)前用于IDO和TDO測試的檢測標(biāo)準(zhǔn)相比，NFK GreenScreen™檢測條件溫和（環(huán)境溫度和中性pH），避免了加熱和添加酸性，堿性或劇毒試劑的情況。熒光測定法基于NTRC開發(fā)的名為NFK Green™的高度特異性和*標(biāo)記。該協(xié)議可以快速實(shí)施測定以進(jìn)行高通量篩選或常規(guī)化合物測試。

通過分別篩選IDO1和TDO的384孔或1536孔格式的約90.000種化合物，證明了其高通量篩選的適用性。篩選所有化合物的濃度為10 µM。

根據(jù)您的需求，我們可以提供1,000或10,000個數(shù)據(jù)點(diǎn)的套件。對于高通量的屏幕（> 100.000數(shù)據(jù)點(diǎn)），我們可以為您提供針對屏幕定制的蛋白質(zhì)，試劑和緩沖液。

我們已經(jīng)證明，該試劑可用于IDO1和TDO的生化測定中檢測NFK。此外，該測定法可用于測量細(xì)胞代謝色氨酸的能力，從而確定IDO1和TDO抑制劑的細(xì)胞效力。

IDO1和TDO的生化測定已開發(fā)為“僅加法”。首先，將化合物和酶結(jié)合。接下來，通過添加L-色氨酸開始反應(yīng)。10或30分鐘后，通過添加NFK Green終止反應(yīng)，并通過在37°C下孵育4小時進(jìn)行反應(yīng)。

NFK Green™與NFK反應(yīng)形成綠色熒光分子，激發(fā)波長為400 nm，發(fā)射波長為510 nm，其中庫化合物的熒光干擾小。該測定法可以在所有常用的熒光或多模式閱讀器上讀取，并且適用于生化以及基于細(xì)胞的測定法來測量色氨酸代謝酶。

有關(guān)更多信息和報(bào)價請求，請發(fā)送電子郵件至services@ntrc.nl。