| ProGreen™桿狀病毒基因組載體DNA編碼維多利亞水母綠色熒光蛋白（GFP）圖1。GFP可以監(jiān)控重組病毒的繁殖，優(yōu)化培養(yǎng)條件，并通過“末端綠色稀釋”來滴定病毒原種。多角體蛋白位點(diǎn)保留用于在強(qiáng)多角體蛋白啟動子控制下插入靶基因。初，多角體蛋白位點(diǎn)被大腸桿菌 β-半乳糖苷酶基因占據(jù)。為了允許插入靶基因，使用Bsu36.I限制性核酸內(nèi)切酶從桿狀病毒DNA中去除了β-半乳糖苷酶基因，該酶在多角體蛋白啟動子的下游，β-半乳糖苷酶基因和下游必需基因ORF 1629中進(jìn)行切割。 |
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| | 圖1. ProGreen™DNA的示意圖?；騁FP由綠色箭頭指示。多面體啟動子由黑色三角形表示。 大腸桿菌 β-半乳糖苷酶基因初存在于多角體蛋白位點(diǎn)中。但是，在市售的ProGreen™載體中，它與必需基因的一部分一起被去除，以允許用β-半乳糖苷酶基因替代感興趣的基因（靶基因），更多信息請參考TECHNOLOGY。
ProGreen™可以驅(qū)動目標(biāo)蛋白質(zhì)的合成速率，該速率接近重組桿狀病毒系統(tǒng)中針對具體目標(biāo)蛋白質(zhì)所能達(dá)到的大速率，同時可以高水平表達(dá)GFP（圖2）。 大腸桿菌β-半乳糖苷酶（β-gal）在多角體蛋白位點(diǎn)中表達(dá)為靶蛋白，以便充分比較ProGreen™和常規(guī)載體BacPAK6™之間靶蛋白的合成速率。如圖2所示，兩種載體都將靶蛋白（β-gal）表達(dá)到大約相同的高水平，而ProGreen™也表達(dá)GFP。 |
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| |  | 圖2.感染了基于BacPAK6™和基于ProGreen™的重組桿狀病毒的昆蟲細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)譜，這些桿狀病毒在多角體蛋白啟動子的控制下在多角體蛋白位點(diǎn)表達(dá)大腸桿菌 β-半乳糖苷酶（β-gal）。 用重組桿狀病毒以每細(xì)胞5個噬斑形成單位感染重組夜蛾 Sf9細(xì)胞，并在感染后60小時收獲。在50 mM Tris-HCl pH 8.0、150 mM EDTA，0.5％NP-40中裂解細(xì)胞，并將裂解液以30,000g離心15分鐘。β-半乳糖苷酶和GFP高度可溶，幾乎僅在上清液中發(fā)現(xiàn)。上清液蛋白在11％SDS-PAGE中分離，并用考馬斯亮蘭染色。 |
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| | 方法。 轉(zhuǎn)到桿狀病毒教程，以獲取簡單的分步操作說明。有關(guān)概念性細(xì)節(jié)，請參閱技術(shù)。如果您已經(jīng)對這些載體有經(jīng)驗(yàn)，則可以使用與BaculoGold™（BD Pharmingen）相同的方法。
推薦的質(zhì)粒轉(zhuǎn)移載體。如下圖3所示，大量的質(zhì)粒與ProGreen™載體兼容，可滿足各種蛋白質(zhì)表達(dá)和純化要求。我們提供可以提供高效信號序列的載體（pAB-bee™，pAB-bee™-8xHis，pAB -bee-FH™質(zhì)粒轉(zhuǎn)移載體）以促進(jìn)分泌蛋白和膜蛋白的表達(dá)。靶蛋白可以使用 GST，His，GFP，MBP或雙重His / MBP或FLAG / His標(biāo)簽表達(dá)，或使用pVL1393質(zhì)粒載體表達(dá)而無需標(biāo)簽。使用pAcAB3載體可以表達(dá)多達(dá)3種靶蛋白，該載體也與ProGreen™-C1和-C2載體兼容。您也可以使用與BacPAK6™或BaculoGold™載體兼容的任何質(zhì)粒轉(zhuǎn)移載體。 |
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| pVL1393，目錄號 ＃B1 | | pAB-GST™，目錄 ＃B5 | | pAB-6xHis™，產(chǎn)品目錄。＃B4 | | pVL-FH，目錄號 ＃B9 | | pAB-6xHis-MBP™，目錄 ＃B7 | | pAB-MBP™，目錄 ＃B6 | | pVL-GFP TM，目錄號。＃B8 | | pAB-bee，目錄號。＃B3 | | pAB-bee™-8xHis，產(chǎn)品目錄 ＃B3H | | pAB-bee-FH™，產(chǎn)品目錄 ＃B3FH | | pAB-bee，目錄號。＃B3 | | | | | | | | ProGreen™，產(chǎn)品目錄。＃A1 |
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| | 圖3.與ProGreen™桿狀病毒載體DNA相容的質(zhì)粒轉(zhuǎn)移載體的示意圖。所有質(zhì)粒轉(zhuǎn)移載體都具有允許質(zhì)粒在大腸桿菌中繁殖的相同質(zhì)粒“主鏈” （由藍(lán)色雙線表示），但它們在多面體蛋白啟動子下游部分（由黑色三角形表示）不同。有關(guān)概念性細(xì)節(jié)，請參閱技術(shù)。單擊質(zhì)粒名稱以獲取有關(guān)每個質(zhì)粒的詳細(xì)信息。單擊Cat＃進(jìn)行定價和訂購。
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| | 表1.與ProGreen™兼容的其他供應(yīng)商的質(zhì)粒轉(zhuǎn)移載體。 |
| | | 諾瓦根 | 法明根 | OET | 克隆泰克 |
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pTriEx™-1.1
pTriEx™-1.1 Hygro
pTriEx™-1.1 Neo
pTriEx™-2
pTriEx™-2 Hygro
pTriEx™-2 Neo
pTriEx™-3
pTriEx™-3 Hygro
pTriEx™-3 Neo
pTriEx™-4
pTriEx™-4 Hygro
pTriEx™-4 Neo
pTriEx™-4 Ek / LIC | pBAC™-1
pBACgus™-1
pBAC™-2cp
pBACgus™-2cp
pBAC™-3
pBACgus™-3
pBAC4x™-1
pBACgus4x™-1
pBAC™-5
pBACgus™-5
pBAC™-6
pBACgus™-6
pBACsurf™ -1 |
| BaculoGold™pAcGHLT-A
BaculoGold™pAcGHLT-B
BaculoGold™pAcGHLT-C
BaculoGold™pAcGP67A
BaculoGold™pAcGP67B
BaculoGold™pAcGP67C
pVL1392-XylE | pOET™1-5
pOET™2
pOET™1C_6xHis
pOET™2C_6xHis
pOET™1N_6xHis
pOET™2N / C_6xHis | BacPAK™8
BacPAK™9
BAcPAK™8-gus |
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| | 如果您尚未使用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)（也稱為桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)或BEVS）工作，可以在TECHNOLOGY上進(jìn)行快速更新。有關(guān)桿狀病毒轉(zhuǎn)染，重組桿狀病毒的繁殖和重組桿狀病毒蛋白表達(dá)研究的簡單在線說明，請轉(zhuǎn)到桿狀病毒教程。 |
