CCK-8細(xì)胞活性檢測試劑盒說明書
上海起發(fā)生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌，打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時(shí)，把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來讓每一個(gè)和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè)，共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國生物制造企業(yè)，圓夢中國。
產(chǎn)品詳情
貨號 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
78EA10020-1ml | 1ml | ￥240.00 |
78EA10020-10ml | 10ml | ￥1820.00 |
78EA10020-30ml | 30ml | ￥3640.00 |
78EA10020-100ml | 100ml | ￥10400.00 |
產(chǎn)品描述
Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細(xì)胞活性檢測試劑盒是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性相關(guān)實(shí)驗(yàn)的快速、高靈敏度檢測試劑盒。
CCK-8 的主要成分為水溶性四唑鹽[Water Soluble Tetrazolium-8] (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，Water Soluble Tetrazolium-8是一種類似于MTT 的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜（Formazan，參考圖1)。
Water Soluble Tetrazolium-8被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養(yǎng)基中。活細(xì)胞的數(shù)目越多，則顏色越深。對于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。
圖1. Water Soluble Tetrazolium-8分子結(jié)構(gòu)及CCK-8檢測原理
產(chǎn)品特點(diǎn)
1. MTT 法生成的甲臜不是水溶性的，需要使用DMSO 等有機(jī)溶劑溶解；而CCK-8 產(chǎn)生的甲臜是水溶性的，省去了溶解步驟，因此減少了該操作步驟帶來的實(shí)驗(yàn)誤差。
2. 由于CCK-8 產(chǎn)生的甲臜是水溶性的，無需吸掉培養(yǎng)基后，再用DMSO 等有機(jī)溶劑溶解，非常適合用于懸浮細(xì)胞的活性測定。
3. 與MTT 方法相比，CCK-8 法線性范圍更寬，靈敏度更高。
4. CCK-8 法對細(xì)胞無毒性，可以多次測定，選取最佳測定時(shí)間。
5. CCK-8 法無需配制，即開即用。
6. CCK-8 法適合大規(guī)模、高通量的樣品檢測。
使用方法
使用方法
1. 在96 孔板中配制100 μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24 小時(shí)（在37℃，5% CO2的條件下）。
2. 向培養(yǎng)板加入10 μL 的待測藥物進(jìn)行處理。
3. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段時(shí)間 （例如：6, 12，24 或48 小時(shí)）。
注：如果不進(jìn)行藥物處理而直接測定細(xì)胞的活性，則不需要2-3 步驟，直接從第4 步操作。
4. 向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D 值的讀數(shù)）。
5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2-4 小時(shí)。
6. 用酶標(biāo)儀測定在450 nm 處的吸光度。
7. 如果暫時(shí)不測定OD 值，可 以向每孔中加入10 μL 1% SDS（w/v） 溶液或者 0.1 M HCl 溶液，并蓋上培養(yǎng)板蓋子，在室溫條件下避光保存。24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
實(shí)驗(yàn)案例分析
圖2. 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：上海起發(fā)CCK8與同仁CCK8的測試效果幾乎相同。
注意事項(xiàng)
1. 由于96 孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，周圍一圈建議不用，改加PBS或水。
2. CCK-8 檢測細(xì)胞活性的原理是通過檢測活細(xì)胞脫氫酶催化的反應(yīng)。如果待測體系中存在還原劑（例如一些抗氧化劑），可能會干擾檢測結(jié)果，需設(shè)法去除其影響。
3. 當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96 孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為1,000 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個(gè)/孔 (100 μL培養(yǎng)基)，且加入CCK-8后孵育的時(shí)間長一些。
4. 如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化，應(yīng)洗滌細(xì)胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8 檢測。
5. 酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過扣除只含有培養(yǎng)基的對照孔中本底的吸光度而消除，因此不會對檢測結(jié)果造成影響。
