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Worthington組織消化指南
引言
組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細(xì)胞生物學(xué)研究的原代細(xì)胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經(jīng)普遍應(yīng)用多年，但是對(duì)其組織消化和細(xì)胞收集的作用機(jī)制卻沒(méi)有全面的理解。 由此導(dǎo)致的結(jié)果便是選擇一種消化方法大多是隨機(jī)選擇或基于過(guò)去的經(jīng)驗(yàn)，而不是在*理解消化原理的基礎(chǔ)上選擇的消化方案，以及如何根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康男拚桨敢垣@得更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
細(xì)胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個(gè)細(xì)胞，而影響結(jié)果的原因有很多，包括（不限于）以下：
1、組織類(lèi)型
2、物種來(lái)源
3、動(dòng)物年齡
4、遺傳改造情況（如knockouts）
5、所用的消化培養(yǎng)液
6、所用的酶
7、消化酶中的雜質(zhì)
8、所用消化酶的工作濃度
9、溫度
10、孵育時(shí)間
通常前四個(gè)原因沒(méi)辦法選擇，而剩下的原因一般由經(jīng)驗(yàn)決定以獲取zui適實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
通過(guò)查閱文獻(xiàn)來(lái)選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)搞得一頭霧水。這些巨大差異來(lái)源于組織胞外基質(zhì)的復(fù)雜而動(dòng)態(tài)的特性，以及過(guò)去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外，組織胞外基質(zhì)由各種蛋白、糖蛋白、脂類(lèi)和糖脂組成，這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育（年齡）之間存在明顯的差異，這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶，如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。
本指南總結(jié)了目前常用組織消化酶的zui適消化和細(xì)胞收集知識(shí)和方法，描述了標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)步驟， 以便于制定一個(gè)*的細(xì)胞分離方案，同時(shí)列舉了一些相關(guān)的參考文獻(xiàn)。
下表列出多種組織的適宜消化酶（含參考文獻(xiàn)，以組織類(lèi)型和物種分類(lèi)，詳見(jiàn)鏈接）
脂肪組織 | 腎上腺組織 | 骨組織 | 腦組織 |
軟骨組織 | 結(jié)腸組織 | 內(nèi)皮組織 | 上皮組織 |
眼 | 心臟 | 腸 | 腎 |
肝 | 肺 | 淋巴結(jié) | 乳腺 |
其它組織 | 其他組織 | 肌組織 | 神經(jīng)組織 |
胰腺 | 腮腺 | 垂體 | 前列腺 |
生殖 | 動(dòng)物鱗片 | 皮膚 | 脾臟 |
干細(xì)胞 | 胸腺 | 甲狀腺/甲狀旁腺 | 扁桃體 |
腫瘤 |
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注：使用Worthington公司消化酶的文獻(xiàn)不限于上表鏈接中所列，一般而言，Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類(lèi)型的消化。
前列腺組織消化手冊(cè)
| 物種 | 詳細(xì)來(lái)源 | 細(xì)胞名稱(chēng) | 消化用酶 | 培養(yǎng)基 | 參考文獻(xiàn) |
| 人類(lèi) | 人類(lèi) | Prostatic cancer fibroblasts | Collagenase: 225 u/ml | RPMI 1640 | Taylor, R., Toivanen, R., Frydenberg, M., Pedersen, J., Harewood, L., Collins, A., Maitland, N. and Risbridger, G.: Human Epithelial Basal Cells are Cells of Origin of Prostate Cancer, Independent of CD133 Status., Stem Cells 30, 1087, 2012 |
| Hyaluronidase: 125 u/ml | |||||
| 人類(lèi) | 人類(lèi), 52-56 歲 | Prostatic stromal cells | Collagenase Type 1: 0.2% | DMEM/F-12 | Le Hanh, Arnold Julia T, McFann Kimberly K, Blackman Marc R: DHT and testosterone, but not DHEA or E2, differentially modulate IGF-I, IGFBP-2, and IGFBP-3 in human prostatic stromal cells, Am J Physiol/Endo 290, E952-60, 2006 |
| 人類(lèi) | 人類(lèi) | Prostate stromal cells | Collagenase Type 1: 0.1% | RPMI 1640 | Nakashiro Koh-Ichi, Hara Shingo, Shinohara Yuji, Oyasu Miho, Kawamata Hitoshi, Shintani Satoru, Hamakawa Hiroyuki, Oyasu Ryoichi: Phenotypic switch from paracrine to autocrine role of hepatocyte growth factor in an androgen-independent human prostatic carcinoma cell line, CWR22R,Am J Pathol 165, 533-40, 2004 |
| 人類(lèi) | 人類(lèi), fetal | Prostatic fibroblasts | Collagenase Type 1: 0.125% | DMEM/F12 | Levine AC, Liu XH, Greenberg PD, Eliashvili M, Schiff JD, Aaronson SA, Holland JF, Kirschenbaum A:Androgens induce the expression of vascular endothelial growth factor in human fetal prostatic fibroblasts, Endocrinology 139, 4672-8, 1998 |
| 小鼠 | 小鼠, 6-8 周 | Prostate epithelial/stem | Collagenase Type 2: 0.5% | HBSS | Burger, P., Gupta, R., Xiong, X., Ontiveros, C., Salm, S., Moscali, D. and Wilson, E.: High Aldehyde Dehydrogenase Activity: A Novel Functional Marker of Murine Prostate Stem/Progenitor Cells., Stem Cells 27, 2220-8, 2009 |
| Trypsin: 0.05% | |||||
| 小鼠 | 小鼠, 2 周 | Prostatic epithelial | Collagenase Type 3: 170 u/ml | DMEM | Imamov Otabek, Morani Andrea, Shim Gil-Jin, Omoto Yoko, Thulin-Andersson Christina, Warner Margaret, Gustafsson Jan-Ake: Estrogen receptor beta regulates epithelial cellular differentiation in the mouse ventral prostate, Proc Natl Acad Sci U S A 101, 9375-80, 2004 |
| 小鼠 | 小鼠, 雄性 | Prostatic stem | Collagenase Type 1: 170 u/ml | DMEM | Dubey P, Wu H, Reiter RE, Witte ON: Alternative pathways to prostate carcinoma activate prostate stem cell antigen expression, Cancer Res 61, 3256-61, 2001 |
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